Ανάπτυξη μεθόδου προσδιορισμού μεταβολιτών της ρετινόλης με χρήση υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης και ηλεκτροχημική ανίχνευση

Abstract

Η βιταμίνη Α και τα παράγωγα της επιτελούν διάφορες βιολογικές λειτουργίες όπως όραση, αναπαραγωγή, κυτταρική διαφοροποίηση και συμμετέχουν και στις αναπτυξιακές διαδικασίες του οργανισμού. Διάφορες χρωματογραφικές μέθοδοι με ποικίλους τρόπους ανίχνευσης έχουν χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό ρετινοειδών σε βιολογικά δείγματα. Σκοπός της παρούσης έρευνας ήταν η ανάπτυξη μιας μεθόδου προσδιορισμού τεσσάρων ρετινοειδών, του 13 -cis ρετινοϊκού οξέος, του 9-cis ρετινοϊκού οξέος, του all-tram ρετινοϊκού οξέος και της ρετινόλης με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης και με ηλεκτροχημική ανίχνευση. Για την ανάπτυξη της μεθόδου δοκιμάστηκαν διάφοροι διαλύτες για κινητή φάση οι οποίοι αποτελούταν από μεθανόλη, ακετονιτρίλιο και νερό με ρυθμιστικό διάλυμα. Η κινητή φάση που έδωσε καλύτερο διαχωρισμό είχε σύσταση 40% ακετονιτρίλιο, 41% μεθανόλη και 19% νερό με ρυθμιστικό διάλυμα CH3COOH 0,03M-CH3COONa 0,03Μ. Με αυτήν την κινητή φάση τρέξαμε τα standard πρότυπα διαλύματα σε δυναμικά του ηλεκτροχημικού ανιχνευτή από 200 έως 1200mV. Το ηλεκτροδυναμικό βολταμογράφημα που προέκυψε υπέδειξε πως το βέλτιστο δυναμικό για την ανίχνευση των ρετινοειδών είναι τα 900mV, τιμή στην οποία το σήμα του θορύβου είναι αρκετά μεγάλο και γι αυτό ως βέλτιστο δυναμικό θεωρήθηκαν τα 800mV. Η εφαρμογή αυτής της μεθόδου σε βιολογικά δείγματα ορού ανθρώπου ήταν επιτυχής ως προς την ανίχνευση. Λόγω του αυξημένου σήματος του θορύβου δεν κατέστη δυνατή η εφαρμογή της σε δείγματα με πολύ μικρές συγκεντρώσεις ισομερών του ρετινοϊκού οξέος. Η παρούσα μελέτη βρίσκεται σε εξέλιξη με σκοπό την βελτιστοποίηση της ηλεκτροχημικής ανίχνευσης ώστε να εφαρμοστεί με επιτυχία και σε βιολογικά δείγματα, με την πιθανότητα να υπάρξει κάποια συσχέτιση των επιπέδων των ρετινοειδών με ασθένειες του ήπατος και να βρει και κλινική εφαρμογή μελλοντικά.