Μοριακή απόκριση στην υποξία : εύρεση καινούργιων μοριακών αλληλεπιδράσεων του επαγόμενου από την υποξία παράγοντα 1α (HIF-1α)

Abstract

Ο επαγόμένος από την υποξία μεταγραφικός παράγοντας HIF-1 κατέχει κεντρικό ρόλο στην απόκριση των κυττάρων σε κατάσταση υποξίας αφού ενεργοποιεί τη μεταγραφή γονιδίων που επιτρέπουν την επιβίωση των κυττάρων. Τα γονίδια αυτά σχετίζονται με την ερυθροποίηση, την αγγειογένεση και τον αναερόβιο μεταβολισμό. Ο HIF-1 αποτελείται από δύο υπομονάδες, την επαγόμενη HIF-la και την σταθερά εκφραζόμενη HIF-Ιβ (ARNT). Ο HIF-la αλληλεπιδρά με μεγάλο αριθμό πρωτεϊνών που ρυθμίζουν την έκφραση και τη λειτουργία του. Πρωταρχικός σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η ανίχνευση και η ταυτοποίηση πρωτεϊνών που αλληλεπιδρούν με τον HIF-la. Έχοντας χρησιμοποιήσει τη μέθοδο των δύο υβριδίων σε προγενέστερα στάδια, αντικειμενικός στόχος ήταν ο διαχωρισμός μεταξύ απομονωθέντων πλασμιδιών "λειών και πλασμιδιών "δολωμάτων" καθώς και η ταυτοποίηση των ενθεμάτων των πλασμιδιών "λειών" . Για την πραγματοποίηση του διαχωρισμού χρησιμοποιήθηκαν δύο μέθοδοι: η πρώτη βασίζεται στις διαφορετικές αυξοτροφίες μεταξύ πλασμιδιών "λειών" και "δολωμάτων" ενώ η μέθοδος περιελάμβανε τον υβριδισμό "λειών" και "δολωμάτων" με ραδιοσημασμένο ανιχνευτή. Επιπλέον, έγινε προσπάθεια να ελεγχθεί το κατά πόσο η ανθρώπινη πρωτεΐνη Male germ cell Rac GTPase Activity Protein (MgcRacGAP) που έχει προκόψει ότι αλληλεπιδρά με τον HIF-1 με το σύστημα των δύο υβριδίων ([Λυμπεροπούλου 2003), επηρεάζει τη λειτουργία του HIF-1 σε ένα απλό in vivo σύστημα . Για να καταστεί δυνατός ο έλεγχος θα έπρεπε αρχικά η MgcRacGAP να κλωνοποιηθεί σε κατάλληλο πλασμιδιακό φορέα. Η κλωνοποίηση δεν ολοκληρώθηκε με επιτυχία και αναμένεται να ξαναεπιχειρηθεί μελλοντικά.