Τα επίπεδα της ρετινόλης και των ισομερών του ρετινοϊκού οξέος στο ωοθυλακικό υγρό

Abstract

Τα ρετινοειδή (retinoids) είναι ουσίες με δράση βιταμίνης Α. Η βιταμίνη A είναι γνωστό ότι παίζει ρόλο στην ανάπτυξη του εμβρύου, λίγα όμως είναι γνωστά για την ύπαρξή της στο ωοθυλακικό υγρό και τον πιθανό ρόλο της στη διαδικασία ωρίμανσης του ωαρίου.(20) Στον άνθρωπο υπάρχει μόνο μια εργασία στην οποία έχουν μετρηθεί τα επίπεδα της ρετινόλης σε ωοθυλακικά υγρά.(34) Δεν έχει αναφερθεί ως τώρα ανίχνευση ρετινοϊκού οξέος σε ωοθυλακικό υγρό στον άνθρωπο ή σε ζώα. Σκοπός της πειραματικής μελέτης είναι ο ταυτόχρονος προσδιορισμός των επιπέδων της ρετινόλης, του 13-cis-, του 9-cis ρετινοϊκού οξέος και του all-trans ρετινοϊκού οξέος σε δείγματα ωοθυλακικών υγρών γυναικών που υποβλήθηκαν σε εξωσωματική γονιμοποίηση, καθώς και σε δείγματα ωοθυλακικών υγρών αγελάδων. Για την ανάλυση των δειγμάτων έγινε χρήση της μεθόδου υγρής χρωματογραφίας υψηλής ανάλυσης (HPLC), ενώ η μεθοδολογία που εφαρμόστηκε αναπτύχθηκε στο εργαστήριο του ΤΖΠ του Τ.Ε.Ι. Λάρισας και έχει χρησιμοποιηθεί και για άλλες κλινικές μελέτες. Δείγμα ωοθυλακικού υγρού ή ορού (200-1 ΟΟΟμΙ) τοποθετείται σε φυγοκεντρικό σωλήνα, στον οποίο προστίθεται ίσος όγκος ακετονιτρίλιου (CH3CN). Το περιεχόμενο του σωλήνα αναδεύεται σε vortex για lmin και κατόπιν φυγοκεντρείται για lOmin στις 4000 στροφές. Μετά τη φυγοκέντρηση, ΙΟΟμΙ από το υπερκείμενο εγχύονται στο σύστημα χρωματογραφίας HPLC. Μέχρι την ανάλυσή τους τα φυγοκεντρημένα δείγματα διατηρούνται στους 4 °C. Η χρωματογραφική ανάλυση διεξήχθη σε θερμοκρασία δωματίου με στήλη ανάστροφης φάσης Hypesil Betabasic Cl8, διαστάσεων 250mm*4,6mm. Η ανάλυση έγινε κάτω από ισοκρατικές συνθήκες έκλουσης με ροή lml/min. Η κινητή φάση συνίσταται από 15% Buffer (Ο,ΟΙΜ CH3COOH 0,2Μ, CH3COONa.2H20), 7%THF, 35%MetOH, 43% CH3CN). Η τιμή της πίεσης είναι περίπου στα 100 barr και τη στιγμή της έκλουσης από τη στήλη η ρετινόλη και οι μεταβολίτες της ανιχνεύονται από ένα ανιχνευτή ορατού-υπεριώδους στα 350nm. Οι χρόνοι έκλουσης του 13-cis ρετινοϊκού οξέος, του 9-cis ρετινοϊκού οξέος, του all trans ρετινοϊκού οξέος και της ρετινόλης από τον UV ανιχνευτή (350nm) σε δείγματα ορού είναι7,848ιηΐη, 8,389min, 8,966 min, 14,154 min. αντίστοιχα. Το ποσοστό ανάκτησης της ρετινόλης είναι 97%, του 13-cis ρετινοϊκού οξέος 88%, του all trans ρετινοϊκού οξέος 97% και του 9-cis ρετινοϊκού οξέος 100%. Παρατηρήθηκε συσχέτιση μεταξύ επιπέδων ρετινόλης και των ισομερών ρετινοϊκών οξέων στο ωοθυλακικό υγρό. Γενικότερα δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση των επιπέδων των ουσιών που προσδιορίστηκαν στον ορό και στο ωοθυλακικό υγρό. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα ερευνών, υπάρχει αναλογία μεταξύ της συγκέντρωσης της ρετινόλης και των ενδο-ωοθυλακικών συγκεντρώσεων της οιστραδιόλης. Τα αποτελέσματα αυτά πιθανόν να παρέχουν μια ένδειξη για το ρόλο της βιταμίνης A στην ανάπτυξη του ωοθυλακίου. Επιπλέον, το γεγονός ότι η συγκέντρωση του 13-cis και all trans είναι μεγαλύτερη στα κυρίαρχα ωοθυλάκια των προβάτων, δηλαδή τα ωοθυλάκια που είναι σε θέση να παράγουν ωάριο, είναι μια ένδειξη του κρίσιμου ρόλου των ρετινοϊκών οξέων στην αναπαραγωγή. Η μελλοντική ανάλυση περισσότερων δειγμάτων θα αποφέρει στατιστικά αποτελέσματα. Τα αποτελέσματα της μελέτης αναμένεται να συμβάλλουν στην καλύτερη κατανόηση του ρόλου της βιταμίνης Α στην ωρίμανση του ωαρίου και διαδικασία της αναπαραγωγής.