Η επίδραση της μεθυλίωσης του rRNA στην ακρίβεια της αποκωδικοποίησης του mRNA

Abstract

Αντικείμενο της παρούσας εργασίας είναι η μελέτη των επιπτώσεων της μεθυλίωσης του rRNA στην ακρίβεια της μετάφρασης στο μύκητα Saccharomyces ceremsiae. Τις θέσεις στόχους μεθυλίωσης αποτελούν νουκλεοτίδια που φυσιολογικά δεν υπόκεινται μετα-μεταγραφική τροποποίηση. Η ακρίβεια της μετάφρασης μετρήθηκε βάση του επιπέδου στο οποίο το ριβόσωμα μεταβάλλει το πλαίσιο ανάγνωσης και δεν αναγνωρίζει το σήμα τερματισμού που τα κωδικόνια λήξης συνθέτουν στο μεταφραζόμενο mRNA. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκαν πλασμίδια τα οποία περιείχαν δυο γονίδια ενζύμων αναφοράς στα οποία παρεμβάλλονται σήματα μετατόπισης πλαισίου ανάγνωσης και λήξης, αντίστοιχα. Για την πρόκληση των νέων μεθυλιώσεων χρησιμοποιήθηκαν ειδικοί φορείς που περιέχουν «οδηγούς» αλληλουχίες RNA για τη μεθυλίωση τεσσάρων καταλοίπων στον κεντρικό βρόγχο του ενεργού κέντρου της πεπτιδυλτρανσφεράσης και ενός καταλοίπου στο κέντρο της ΰΤΡάσης της μεγάλης ριβοσωμικής υπομονάδας. Κατά αυτόν τον τρόπο λοιπόν, διαπιστώθηκε ότι η μεθυλίωση έχει ποικίλες επιδράσεις στην ακρίβεια της αποκωδικοποίησης του mRNA καθώς σε δύο των περιπτώσεων επηρεάζει την λειτουργία της μετάφρασης συνολικά, και στις υπόλοιπες αυξάνει το επίπεδο αναποτελεσματικότητας του σήματος λήξης TGA. Τέλος, σε μία περίπτωση μεθυλίωσης δεν παρατηρήθηκε καμία επιρροή.