Δημιουργία ελλειπτικών κατασκευών του μεταγραφικού παράγοντα NSCL1 του κοτόπουλου και εύρεση της περιοχής με τη δράση ενεργοποίησης / καταστολής της μεταγραφής

Abstract

Οι πρωτεΐνες NSCL1 (Neural Stem Cell Leukemia) και NSCL2 αποτελούν μεταγραφικούς παράγοντες της οικογένειας των bHLH (basic Helix-Loop-Helix) μεταγραφικών παραγόντων. Η οικογένεια των bHLH μεταγραφικών παραγόντων κατέχει κεντρικό ρόλο σε διάφορα αναπτυξιακά γεγονότα στους ευκαρυωτικούς οργανισμούς. Τα γονίδια NSCL φαίνονται, μέσα από διάφορα πειράματα στον ποντικό και όχι μόνο, να εκφράζονται αποκλειστικά σε αναπτυσσόμενα νευρικά κύτταρα του Κ.Ν.Σ και του Κατά τη διάρκεια της παρούσας εργασίας έγινε δυνατή η δημιουργία ελλειπτικών κατασκευών DNA της κωδικής περιοχής του γονιδίου του cNSCLl μεταγραφικού παράγοντα της όρνιθας με τη βοήθεια της PCR (Polymerase Chain Reaction) αντίδρασης. Το υπόστρωμα της PCR αντίδρασης αποτέλεσε η κωδική περιοχή του γονιδίου του cNSCLl που είχε προηγούμενα απομονωθεί από μία φαγική cDNA βιβλιοθήκη εμβρύου όρνιθας πέντε ημερών. Επίσης, χρησιμοποιώντας τις παραπάνω ελλειπτικές κατασκευές προσπαθήσαμε να ανιχνεύσουμε την περιοχή της κωδικής περιοχής του cNSCLl γονιδίου που ευθύνεται για την ικανότητα μεταγραφικής ρύθμισης που φέρει ο συγκεκριμένος μεταγραφικός παράγοντας. Βρέθηκε, με πειράματα διαμόλυνσης (transfection) κυττάρων θηλαστικών, πως ο μεταγραφικός παράγοντας cNSCLl δρα πράγματι σαν μεταγραφικός ενεργοποιητής, όπως είχε ήδη αναφερθεί από προηγούμενες μελέτες, αλλά ο εντοπισμός της δράσης της μεταγραφικής ενεργοποίησης περιπλέκεται αρκετά και χρειάζεται σίγουρα περαιτέρω διερεύνηση.