Μελέτη της μεταγραφικής ρύθμισης του υποκινητή του ανθρώπινου γονιδίου TIN-ag (Tubulointerstitial nephritis antigen) σε κυτταρικές σειρές

Abstract

To TIN-ag είναι μια γλυκοπρωτε'ίνη της εξωκυττάριας ουσίας η οποία έχει μοριακό βάρος 58 kDa. Το γονίδιο αυτό παίζει πολύ σημαντικό ρόλο στην δημιουργία και την λειτουργία του νεφρικού ιστού για δύο κυρίους λόγους. Αρχικά μελέτες ανοσοφθορισμού έδειξαν ότι το TIN-ag εκφράζεται στη βασική επιθηλιακή μεμβράνη του νεφρικού ιστού και συγκεκριμένα στο εγγύς εσπειραμένο σωληνάριο. Επίσης το TIN-ag είναι μια αναπτυξιακά ρυθμιζόμενη πρωτεΐνη η οποία αλληλεπιδρά με την λαμινίνη και το κολλαγόνο τύπου IV, και προάγει την κυτταρική προσκόλληση μια διεργασία πολύ κρίσιμη για την οργανογένεση κατά την εμβρυϊκή ζωή. Πρωταρχικός σκοπός της εργασίας ήταν η εύρεση πιθανών θέσεων δέσμευσης μεταγραφικών παραγόντων πάνω στον υποκινητή του ανθρώπινου γονιδίου του TINag. Πραγματοποιήσαμε βιοπληροφορική ανάλυση με το πρόγραμμα ECR Browser και μελετήσαμε τον υποκινητή του TIN-Ag. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης μας έδειξαν ότι η μεταγραφική ρύθμιση του υποκινητή του γονιδίου ίσως να επηρεάζεται από τους μεταγραφικούς παράγοντες HNF1 (HNFl-a και HNFl-β), διότι υπάρχουν πιθανές θέσεις πρόσδεσης στο σημείο έναρξης της μεταγραφής του υποκινητή. Για να μπορέσουμε να μελετήσουμε τον τρόπο με τον οποίο οι μεταγραφικοί παράγοντες HNF1 επάγουν την μεταγραφή του υποκινητή του γονιδίου, πραγματοποιήσαμε κλωνοποίηση του υποκινητή του ανθρώπινου γονίδιου του TINag σε πλασμίδιο μπροστά από το γονίδιο της λουσιφεράσης και μελετήσαμε την ενεργότητα του σε in vitro κυτταρικά συστήματα. Πραγματοποιήσαμε διαμόλυνση κυττάρων ΗΕΚ-293 και ΗΚ-2 με το πλασμίδιο που φέρει τον υποκινητή του γονιδίου TIN-Ag (pGL3-TINpro) και επωάσαμε τα κύτταρα απουσία και παρουσία των μεταγραφικών παραγόντων HNF1. Τελικά από τα πειράματα που πραγματοποιήσαμε διαπιστώσαμε ότι μια ισομορφή των μεταγραφικών παραγόντων HNF1, συγκεκριμένα η HNF-Ιβ, είναι ικανή να επάγει την μεταγραφή του υποκινητή του γονιδίου του TIN-ag.