Μελέτης της γονιδιακής έκφρασης στις γονάδες ψαριών του Παγασητικού Κόλπου

Abstract

Στην παρούσα εργασία επιδιώχθηκε μια απλή προσέγγιση της μελέτης της διαφορικής γονιδιακής έκφρασης , απομονώνοντας το ολικό m RNA , από τις αρσενικές και θηλυκές γονάδες συγκεκριμένων ειδών ψαριών του Παγασητικού Κόλπου . Για τον σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκε μια παραλλαγή της αρχικής μεθόδου Differential Display , για την ταυτοποίηση και κλωνοποίηση όλων των διαφορικά εκφρασμένων m RNAs που απομονώθηκαν από τα δείγματά μας , Συγκεκριμένα εφαρμόστηκε η τροποποιημένη μέθοδος DD - PCR , η οποία διαφοροποιείται στην χρήση απλού oligo ( d Τ ) εκκινητή στην αντίστροφη μεταγραφή ( RT ) , στους τυχαίους εικοσιπενταμερείς και εικοσιεξαμερείς εκκινητές σε συνδυασμό με τριαντακονταμερείς εκκινητές στην αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης ( PCR ) , στην αύξηση των κύκλων της PCR , και τέλος στην χρώση της πηκτής πολυακρυλαμίδης με νιτρικό άργυρο . Η μέθοδος χρησιμοποιήθηκε στις γονάδες αρσενικών και θηλυκών ατόμων ) της γόπας ( Boops boops ), του μπακαλιάρου ( Merlangius merlangus ) και του κολιού ( Scomber japonicus ) με πολύ καλά αποτελέσματα. Επίσης αναλύθηκαν σε SDS - ηλεκτροφόρηση οι πρωτεΐνες του κυτταροπλάσματος: και των πυρήνων των παραπάνω δειγμάτων και βρέθηκαν χαρακτηριστικές πρωτεΐνες που διαφοροποιούν τα δείγματα μεταξύ τους είτε αναφερόμαστε σε αρσενικές , είτε σε θηλυκές γονάδες των ψαριών.