Κλωνοποίηση, υπερέκφραση και απομόνωση του παράγοντα FEMX από το GRAM (+) βακτήριο Staphylococcus aureus

Abstract

Το πεπτιδογλυκανικό τμήμα του κυτταρικού τοιχώματος στο βακτήριο Staphylococcus aureus αποτελείται από γραμμικές αλυσίδες εναλλασσόμενων μονάδων Ν-ακετυλογλυκοζαμίνης και Ν-ακετυλομουραμικού οξέος, οι οποίες συνδέονται μεταξύ τους με πενταπεπτίδια γλυκίνης. Η γλυκίνη ενσωματώνεται μέσω της δράσης των μη ριβοσωμικών πεπτιδυλο-τρανσφερασών FemA, FemB και FemX και με δότη γλυκίνης τα Gly-tRNAG1y μόρια. Έχουν ανιχνευτεί τουλάχιστον 4 ισοδεκτικά μόρια tRNA0^ που εκτός από την πρωτεϊνοσύνθεση, εμπλέκονται και στη σύνθεση του κυτταρικού τοιχώματος. Τα tRNAs αυτά αμινοακυλιώνονται από την ίδια αμινοακυλο-tRNA συνθετάση της γλυκίνης, αλλά ακολουθούν διαφορετικές πορείες ανάλογα με τις κυτταρικές ανάγκες. Δεδομένης της μολυσματικότητας του S. aureus καθώς και του γεγονότος ότι η ανθεκτικότητα του σε αντιβιοτικά εξαρτάται άμεσα από την ακεραιότητα των γεφυρών γλυκίνης, η ανίχνευση των παραγόντων που εμπλέκονται στη μεταφορά και ενσωμάτωση της γλυκίνης, θα αποκαλύψει σημαντικούς στόχους νέων αντιβιοτικών φαρμάκων. Στην παρούσα εργασία πραγματοποιήθηκε η κλωνοποίηση του γονιδίου του FemX από MR (multi-resistant) όσο και από MS (methicillin-susceptible) στελέχη του βακτηρίου S. aureus, και ακολούθησε η υπερέκφραση και απομόνωση της εν λόγω πρωτεΐνης, προκειμένου να αποτελέσει κατάλληλο υπόστρωμα για την περαιτέρω διαλεύκανση αλληλεπιδράσεων με άλλους παράγοντες που πιθανώς να συμμετέχουν στη μεταφορά της γλυκίνης στο κυτταρικό τοίχωμα.