Διερεύνηση και χαρτογράφηση των δομικών συστατικών του ν-τελικού άκρου της SRPK1a που ευθύνονται για τις εξειδικευμένες αλληλεπιδράσεις της

Abstract

Οι SRPKs (SR protein kinases) αποτελούν τάξη κινασών που φοσφωρυλιώνει διπεπτίδια σερίνης - αργινίνης (SR domains). Έχουν αναγνωρισθεί 9 γονίδια που κωδικοποιούν SR πρωτεϊνικές κινάσες, σε διαφορετικούς οργανισμούς (οι SRPK1 και SRPK2 στον άνθρωπο, οι SRPK1 και SRPK2 στο ποντίκι, η SRPK1 στη μύγα Drosophila, η SRPK1 στο φυτό Arabidopsis, η SPK-1 στο σκουλίκι C. Elegans καθώς και οι SKY1 και Dskl στους σακχαρομύκητες cerevisiae και pompe, αντίστοιχα) υοδηλώνοντας μια συντηρημένη κατά τη διάρκεια της εξέλιξης οικογένεια πρωτεϊνών. Μια ισομορφή της SRPK1 είναι η SRPKla, που περιέχει 171 επιπλέον αμινοξέα στο Ν-τελικό της άκρο, βρέθηκε πρόσφατα και ιίλωνοποιήθηκε, (26) με παρόμοια λειτουργία και ενζυμική δράση με αυτή της SRPK1; Με το σύστημα των δύο υβριδίων βρέθηκε ότι αλληλεπιδρά εξειδικευμένα (η SRPK1 δεν αλληλεπιδρά) με αρκετές κυτταρικές πρωτεΐνες, δυο εκ των οποίων είναι η ρ53 και ο SAF-B, που δεν περιέχουν SR περιοχές, γεγονός που αποτελεί πρόκληση για την ανίχνευση της συμπεριφοράς της. Πιστεύουμε ότι η διαλεύκανση της λειτουργίας της SRPKla θα παρέχει πολύτιμες πληροφορίες για τη δράση των SR πρωτεϊνικών κινασών. Ενίσ^υτικό της παραπάνω άποψης είναι ότι η περιοχή που τη χαρακτηρίζει είναι πλούσια σέ προλίνες, ιδιότητα που περιγράφηκε ως ευνοϊκή για τις αλληλεπιδράσεις πρωτεΐνης -πρωτεΐνης και συμβαδίζει με το γεγονός της απομόνωσης ι αρκετών κυτταρικών πρωτεϊνών που αλληλεπιδρούν ισχυρά με τη συγκεκριμένη περιοχή. Για να προσδιορίσουμε τα αμινοξέμ. που είναι υπεύθυνα για τις εξειδικευμένες αλληλεπιδράσεις της SRPKla, προκαλέσαμε με ι-χημική μεταλλαξογένεση τυχαίες μεταλλάξεις στο Ν -τελικό - της άκρο και επιλέξαμε αυτές που αναιρούν τις αλληλεπιδράσεις της. Οι πρώτοι τέσσερις μεταλλαγμένοι κλώνοι που Μελετήθηκαν υποδεικνύουν συγκεκριμένα αμινοξέα της αλληλουχίας της SRPKla ως υπεύθυνα για την αλληλεπίδραση SRPKla-p53.