Κλωνοποίηση και έκφραση της αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσης του ασπαραγινικού οξέος και των ομόλογων υποστρωμάτων της από το βακτήριο Neisseria Meningitidis

Abstract

Οι αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσες (aaRS) αποτελούν πολύτιμα καταλυτικά μόρια που απαντώνται σε όλους τους ζωντανούς οργανισμούς. Συνιστούν μια πολύπλοκη ομάδα ενζύμων που εγγυώνται την πιστότητα της μεταφοράς της γενετικής πληροφορίας από το DNA στις πρωτεΐνες. Σύμφωνα με τον Crick (Adaptor Hypothesis, 1958) για κάθε αμινοξύ υπάρχει μία αντίστοιχη αμινοάκυλο-tRNA συνθετάση. Ωστόσο σε ορισμένους οργανισμούς, κυρίως στα αρχαία, σε μερικά βακτήρια και στα περισσότερα παθογόνα για τον άνθρωπο βακτήρια, υπάρχουν λιγότερα από τα αναμενόμενα 20 είδη αμινάκυλο-tRNA συνθετασών. Στους οργανισμούς αυτούς εκφράζεται μια χαμηλής εξειδίκευσης αμινοάκυλο-tRNA συνθετάση του ασπαραγινικού οξέος (ND-AspRS) η οποία συνθέτει κακοφορτισμένα Asp-tRNAiVsn, τα οποία ακολούθως αμιδόνονται σε Asn-tRNA^11 με τη δράση μιας AdT αμιδοτρανσφεράσης, μέσω του έμμεσου μονοπατιού της αμινοακυλίωσης. Στόχος της παρούσας εργασίας είναι η κλωνοποίηση του γονιδίου aspS από το βακτήριο Ν. Meninigitidis και στη συνέχεια η έκφραση και απομόνωση της εκφραζόμενης αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσης του ασπαραγινικού οξέος, που σύμφωνα με γενωμικές αναλύσεις, πιστεύεται ότι είναι χαμηλής εξειδίκευσης. Δεύτερος στόχος είναι η κλωνοποίηση των γονιδίων που κωδικοποιούν τα μόρια tRNAAsP και tRNAAsn μέσω της μεθόδου του cassette-cloning.