Human papillomavirus : μοριακή διάγνωση και ταυτοποίηση

Abstract

Ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας είναι ένας από τους πιο συχνούς καρκίνους παγκοσμίως. Ο κυριότερος παράγοντας κινδύνου, για την ανάπτυξη της τραχηλικής νεοπλασίας, είναι η μόλυνση με τον ιό Human Papillomavirus (HPV), γεγονός που προκύπτει από επίκαιρα δεδομένα επιδημιολογίας και μοριακής βιολογίας. Η σημαντικότερη πηγή μόλυνσης με τον ιό είναι η σεξουαλική επαφή. Περισσότεροι από 130 διαφορετικοί HPV έχουν ταυτοποιηθεί μέχρι σήμερα και υποδιαιρούνται σε βλεννογονικούς και δερματικούς τύπους. Οι βλεννογονικοί τύποι διακρίνονται περαιτέρω σε υψηλού , ενδιάμεσου και χαμηλού κινδύνου βάσει της σχέσης τους με τον καρκίνο του τραχήλου. Οι υψηλού και ενδιάμεσου κινδύνου τύποι HPV σχετίζονται κυρίως με κακοήθεις όγκους του τραχήλου, ενώ οι χαμηλού κινδύνου συνδέονται με χαμηλού βαθμού αλλοιώσεις και σπάνια προοδεύουν σε κακοήθεια. Γενικά οι HP Vs, μέλη της οικογένειας Papillomaviridae, είναι μια ετερογενής ομάδα μικρών ιών με κυκλικό δίκλωνο DNA. Το κυκλικό γένωμα είναι περίπου 8 Kbp σε μέγεθος και οργανώνεται σε οχτώ ανοιχτά αναγνωστικά πλαίσια: μια ανιούσα ρυθμιστική περιοχή (upstream regulatory region, URR), έξι πρώιμα γονίδια (El, Ε2, και Ε4-Ε7) και δύο όψιμα γονίδια (L1 και L2). Όπως αποδεικνύεται, γυναίκες μολυσμένες με υψηλού και ενδιάμεσου κινδύνου HPV τύπους, έχουν αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης τραχηλικής νεοπλασίας. Έτσι, η ανίχνευση και ταυτοποίηση των HPV αποδεικνύεται διαγνωστικά και προγνωστικά σημαντική. Για το σκοπό αυτό γίνονται προσπάθειες από πολλές ερευνητικές ομάδες για την καθιέρωση μιας μεθόδου, που θα μπορεί να ανιχνεύει με ακρίβεια την παρουσία HPV-DNA και θα επιτρέπει τον επακριβή προσδιορισμό του HPV τύπου. Καθώς οι HPVs είναι μια ετερογενής ομάδα, η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι η προτεινόμενη μεθοδολογία για την αναγνώριση και ταυτοποίηση του ιού σε απομονωμένο DNA. Σε αυτό το πλαίσιο, στην παρούσα εργασία, τρία ευρέως χρησιμοποιούμενα PCR εκκινητικά ζεύγη εκτιμήθηκαν για την ανίχνευση και ταυτοποίηση των HPV. Τα τρία εκκινητικά ζεύγη προέρχονται από τη συντηρημένη αλληλουχία του LI ORF. συμπερασματικά, τα δύο εκκινητικά ζεύγη, GP5+/6+ και PGMY09/11, δίνουν περίπου ίδια ευαισθησία ανίχνευσης η οποία είναι καλύτερη από αυτή του ΜΥ09/11 εκκινητικού ζεύγους. Ενώ η ευαισθησία ανίχνευσης των δύο πρώτων μεθόδων, είναι καλή, δεν ισχύει το ίδιο και για τη συμφωνία τους. Τα αποτελέσματα μας προτείνουν ότι για την ανίχνευση του HPV απαιτούνται περισσότερες από μια PCR για την ανίχνευση των θετικών αποτελεσμάτων. Η RFLP ανάλυση προσδιόρισε τον τύπο HPV σε τέσσερα κλινικά δείγματα (τύποι υψηλού κινδύνου HPV 16 και 51), την ύπαρξη μιγμάτων σε δύο και τέλος σε δύο δείγματα θετικά δεν προσδιορίστηκε ο τύπος καθώς αυτός θα πρέπει να είναι εκτός των 16 τύπων υψηλού, ενδιάμεσου ή χαμηλού κινδύνου οι οποίοι μελετήθηκαν.