Υπερέκφραση, καθαρισμός και μελέτη της δραστικότητας της ανθρώπινης πολυ(Α) - εξειδικευμένης ριβονουκλεάσης (PARN)

Abstract

Η αποικοδόμηση του mRNA ξεκινάει με την βράχυνση της πολυ(Α) ουράς. Σε ανώτερους οργανισμούς το κύριο ένζυμο για την διαδικασία της αποαδενυλίωσης είναι η πολυ(Α)-εξειδικευμένη ριβονουκλεάση, PARN, η οποία προσδένεται ειδικά στην πολυ(Α) ουρά και την αποικοδομεί με φορά 3 -5 , ενώ το κάλυμμα στο 5 άκρο διεγείρει την επεξεργαστική δράση του ενζύμου in vitro. Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας αφορούν στην έκφραση, τον καθαρισμό και τη μελέτη της PARN. Ειδικότερα, μελετήθηκε η επίδραση των νουκλεοτιδίων πουρίνης σε in vitro αντιδράσεις αποαδενυλίωσης. Βρέθηκε ότι τα GMP, GDP, GTP και AMP, ADP, ΑΤΡ μειώνουν τη δραστικότητα του ενζύμου. To GMP και το ΑΤΡ ανέστειλλαν τη δραστικότητα του ενζύμου μη συναγωνιστικά, ενώ τα GMP και GDP, καθώς και τα ΑΜΡ και ADP έδρασαν ως συναγωνιστικοί αναστολείς. Επίσης εξετάστηκε η επίδραση του Mg(II) στην ανασταλτική ικανότητα των παραπάνω νουκλεοτιδίων και δείχνεται πως το ιόν επηρεάζει διαφορετικά τη δράση των ΥΤΡ και ΥΜΡ από αυτή των ΤΜΡ.