Αποσιώπηση της πολυ(Α) ριβονουκλεάσης (PARN) με χρήση δίκλωνων μορίων RNA σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα

Abstract

Η πολυ(Α) ουρά κατέχει σπουδαίο ρόλο στον κύκλο ζωής των mRNAs. Συμμετέχει στις διαδικασίες ωρίμανσης του mRNA, στην έξοδο στο κυτταρόπλασμα, στην έναρξη της μετάφρασης, ενώ από αυτή ξεκινά η αποικοδόμησή τους. Η τελευταία διαδικασία γίνεται κατά τη φορά 3 -5' από ένζυμα γνωστά ως αποαδενυλάσες. Στα θηλαστικά, η πολυ(Α)- εξειδικευμένη ριβονουκλεάση, PARN είναι το κύριο ένζυμο αποικοδόμησης των πολυ(Α) ουρών. Η παρούσα εργασία αποσκοπεί στην αποσιώπηση της PARN σε καλλιέργειες ανθρώπινων κυττάρων. Σχεδιάστηκαν και χρησιμοποιήθηκαν μικρά δίκλωνα μόρια RNA (siRNA) για την αποσιώπηση του ενζύμου σε κύτταρα Hep2. Χρησιμοποιήθηκαν τρία siRNAs, όπου όλα αποσιώπησαν επιτυχώς το ένζυμο, όπως φάνηκε σε πειράματα ανοσοαποτύπωσης. Ακόμα, διερευνήθηκε η αποτελεσματικότητα του συνδυασμού και των τριών siRNAs. Η εκτίμηση των αποτελεσμάτων έδειξε πως η ταυτόχρονη διαμόλυνση των κυττάρων και με τα τρία διαφορετικά siRNAs πέτυχαν εξίσου ικανοποιητική αποσιώπηση της PARN. Τα αποτελέσματα δείχνουν πως τα siRNA μπορούν να χρησιμοποιηθούν αποτελεσματικά για τη μελέτη του ρόλου του ενζύμου στα επίπεδα έκφρασης πληθυσμών RNA του κυττάρου.