Μελέτη της επίδρασης του EGF σε ινοβλάστες σε σχέση με την έκφραση φυσιολογικού p53 γονιδίου

Abstract

Ένας κακοήθης όγκος δεν αποτελείται αποκλειστικά από καρκινικά κύτταρα, αλλά και από κύτταρα του καρκινικού στρώματος, κυριότερο συστατικό του οποίου είναι οι ινοβλάστες. Το γονίδιο ρ53 ρυθμίζει το κυτταρικό γήρας( senescence) και την απόπτωση. Το γονίδιο ρ53 απενεργοποιείται από αυθόρμητες μεταλλάξεις οι οποίες παρατηρούνται στους ινοβλάστες του στρώματος. Το καρκινικό στρώμα το οποίο παρουσιάζει έλλειψη του γονιδίου ρ53 προκαλεί την ανάπτυξη ενός πιο επιθετικού καρκινικού όγκου σε αντίθεση με το γενετικά φυσιολογικό καρκινικό στρώμα. Επιπλέον είναι γνωστό ότι κάτω από φυσιολογικές συνθήκες πολλαπλασιασμού των κυττάρων η απουσία του ρ53 γονιδίου δεν ευνοεί το πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Στο καρκινικό στρώμα παράγονται από τα καρκινικά κύτταρα αυξητικοί παράγοντες σε αυξημένα επίπεδα. Στόχος της εργασίας αυτής είναι να δούμε τι αποτελέσματα μπορεί να επιφέρει ένας αυξητικός παράγοντας όπως ο EGF στη κυτταρική ανάπτυξη των ινοβλαστών και συγκεκριμένα εμβρυϊκών ινοβλαστών ποντικού(ΜΕΕ). Έτσι θα διεξάγουμε πείραμα in vitro όπου θα αναπτύξουμε αρχικά ινοβλάστες σε διαφορετικές συγκεντρώσεις του EGF και στη συνέχεια θα προχωρήσουμε σε αποτύπωμα Western για την πρωτεΐνη sma η οποία σχετίζεται με τη κινητικότητα των κυττάρων. Από τα αποτελέσματα μας παρατηρούμε ότι οι ινοβλάστες φυσιολογικού τύπου παρουσιάζουν μικρότερη κυτταρική αύξηση μετά από τη χορήγηση του αυξητικού παράγοντα EGF σε διαφορετικές συγκεντρώσεις σε σχέση με τους ινοβλάστες από τους οποίους λείπει το γονίδιο ρ53. Επιπλέον διαπιστώνουμε ότι η έκφραση της sma πρωτεΐνης είναι πολύ μεγαλύτερη στους ινοβλάστες από τους οποίους λείπει το γονίδιο ρ53, άρα και η κινητικότητα των ινοβλαστών αυτών είναι μεγαλύτερη. Το σημαντικότερο συμπέρασμα της εργασίας μας πιθανότατα είναι πως οι ινοβλάστες του στρώματος από τους οποίους απουσιάζει το ρ53 επικρατούν στο όγκο λόγω της αυξημένης τους ευαισθησίας σε αυξητικούς παράγοντες όπως ο EGF.