Κλωνοποίηση, υπερέκφραση και καθαρισμός της L25 ριβοσωμικής πρωτεΐνης από το ελικοβακτηρίδιο του πυλώρου : helicobacter pylori

Abstract

Η πρωτεϊνική σύνθεση είναι ταυτόσημη με την έννοια της ζωής. Σημαντικότατο ρόλο στη διαδικασία αυτή διαδραματίζουν τα ριβοσώματα, αυτά τα ριβονουκλεοπρωτεϊνικά σωματίδια στα οποία συντίθενται οι πολυπεπτιδικές αλυσίδες, καθώς επίσης και οι μηχανισμοί της αμινοακυλίωσης του tRNA. Στα ριβοσώματα, RNA και πρωτεΐνες συνεργάζονται για την κατάλυση του σχηματισμού πεπτιδικών δεσμών υπό τις οδηγίες του αγγελιοφόρου RNA. Η αμινοακυλίωση αποτελεί κεντρική κυτταρική διαδικασία κατά την οποία συντίθενται τα αμινοάκυλο- tRNAs από τις αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσες (AARSs) που αναλαμβάνουν τη διατήρηση της πιστότητας του γενετικού μηνύματος. Πολλές μελέτες υποστηρίζουν την ύπαρξη μιας πιθανής εξελικτικής σχέσης μεταξύ ριβοσωμικών πρωτεϊνών και αμινοάκυλο-tRNA συνθετασών, όμως οι λειτουργίες τους είναι διαφορετικές. Η ύπαρξη ωστόσο μιας ριβοσωμικής πρωτεΐνης, της L25, με υψηλή δομική ομοιότητα ως προς τη περιοχή δέσμευσης του αντικωδικονίου της αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσης της γλουταμίνης (GlnRS), ενός εκ των νεότερων μελών αυτής της οικογένειας ενζύμων, καθώς η γλουταμίνη είναι ένα από τα τελευταία αμινοξέα που προστέθηκαν στο ρεπερτόριο των 20 γνωστών έως σήμερα αμινοξέων, η οποία μάλιστα συναντάται περισσότερο σε ανώτερους ευκαρυωτικούς οργανισμούς, εγείρει σοβαρά ερωτήματα για τη σχέση αυτή. Στη παρούσα εργασία πραγματοποιήθηκε η κλωνοποίηση, η υπερέκφραση και ο καθαρισμός της L25 του Helicobacter pylori, ενός οργανισμού που στερείται την GlnRS, και ακολούθησε δοκιμή αμινοακυλίωσης για να διαπιστωθεί η λειτουργική ομοιότητα των πρωτεϊνών αυτών. Τα αποτελέσματα έδειξαν πως η L25 δεν έχει δράση αμινοάκυλο-tRNA συνθετάσης της γλουταμίνης, όμως η εξελικτική σχέση των πρωτεϊνών αυτών παραμένει ένα ανοιχτό ερώτημα.