dc.description.abstract | Τα λεία μυϊκά κύτταρα των αεραγωγών, όταν βρίσκονται σε πρωτογενείς
καλλιέργειες παρουσία ορού εμβρύου βοός, εμφανίζουν έναν μη διαφοροποιημένο
«συνθετικό» φαινότυπο. Έχει δειχθεί ότι αν αφαιρεθεί ο ορός από το θρεπτικό μέσο
της καλλιέργειας, τα λεία μυϊκά κύτταρα ανακτούν τον διαφοροποιημένο «συσταλτό»
φαινότυπο. Στην εργασία αυτή, μελετήθηκαν οι μηχανισμοί επαγωγής της
υπομονάδας α του «επαγόμενου από την υποξία μεταγραφικού παράγοντα 1» - HIF-
1α σε λεία μυϊκά κύτταρα τραχείας κουνελιού υπό συνθήκες in vitro διαφοροποίησης.
Ο «επαγόμενος από την υποξία μεταγραφικός παράγοντας 1» (HIF-1) είναι ο
κύριος ρυθμιστής της κυτταρικής υποξίας. Αποτελείται από δύο υπομονάδες: την α
και τη β. Η υπομονάδα β εκφράζεται συνεχώς ενώ η υπομονάδα α υπόκειται σε
ρύθμιση. Έχει δειχθεί, πρόσφατα, ότι το κοβάλτιο επάγει την έκφραση του HIF-la σε
πρωτογενείς καλλιέργειες λείων μυϊκών κυττάρων παρουσία ορού, μέσω της αύξησης
της σύνθεσης της πρωτεΐνης που μεσολαβείται από το μονοπάτι της κινάσης της 3-
φωσφατιδυλ-ινοσιτόλης και της παραγωγής ενεργών ριζών οξυγόνου.
Κατά τη διεξαγωγή της εργασίας αυτής, λεία μυϊκά κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε
θρεπτικό μέσο χωρίς ορό, προκειμένου να ξεκινήσει η διαδικασία διαφοροποίησής
τους. Κάτω από τις συνθήκες αυτές, ο ορός επάγει την έκφραση του HIF-la. Ο
σκοπός μας ήταν να διερευνήσουμε την επίδραση του χρόνου καλλιέργειας σε
θρεπτικό μέσο απουσία ορού, και συνεπώς της διαφοροποίησης, σε πρωτογενείς
καλλιέργειες λείων μυϊκών κυττάρων τραχείας στην επαγωγή του HIF-la καθώς και
την κινητική της επαγωγής αυτής. Επιπλέον, ελέγξαμε την επίδραση της προσθήκης
ορού σε διαφορετικές συγκεντρώσεις στο μέσο καλλιέργειας στην επαγωγή του HIFla.
Ως επαγωγείς του HIF-la χρησιμοποιήσαμε C0CI2, ορό ή συνδυασμό τους. Για το
λόγο αυτό, δημιουργήσαμε πρωτογενείς καλλιέργειες λείων μυϊκών κυττάρων από
τραχεία κουνελιού, τα οποία ταυτοποιήθηκαν με έμμεσο ανοσοφθορισμό και χρήση
μονοκλωνικού αντισώματος.
Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση του HIF-la επάγεται από την πρώτη
ημέρα αφαίρεσης του ορού από το θρεπτικό μέσο. Σε διάστημα τριών ημερών
αφαίρεσης του ορού, ο HIF-la επάγεται 2 ώρες μετά την προσθήκη των επαγωγέων
και βρίσκεται σε υψηλά επίπεδα για διάστημα 6 ωρών. Τέλος, ο ορός σε
συγκέντρωση 1% ή υψηλότερη στο θρεπτικό μέσο καλλιέργειας επάγει την έκφραση
του HIF-la, φαίνεται όμως ότι οι μεγάλες συγκεντρώσεις, πιθανόν, να δρουν
ανασταλτικά στην επαγωγή αυτή. | el |