Χωροχρονική μελέτη προτύπου έκφρασης mRNA του αναστολέα νευραξονικής αναγέννησης Nogo - A, σε πειραματικό μοντέλο πολλαπλής σκλήρυνσης

Abstract

Ο Nogo-A, ένας αναστολέας της νευρικής ανάπτυξης, έχει βρεθεί να παίζει σημαντικό ρόλο στον έλεγχο της νευραξονικής αναγέννησης μετά από τραυματισμό. Τα πρότυπα έκφρασης του mRNA του έχουν μελετηθεί στο κεντρικό νευρικό σύστημα (ΚΝΣ) τόσο φυσιολογικών όσο και μετά από τραυματισμό εγκεφάλου και νωτιαίου μυελού, ενήλικων επίμυων. To mRNA του Nogo-A βρέθηκε να εκφράζεται άφθονο στους περισσότερους εγκεφαλικούς πυρήνες νευρώνων των φυσιολογικών ζώων συμπεριλαμβανομένου νευρώνων του ιππόκαμπου, πυρήνων της ηνίας, απιοειδή φλοιού, ερυθρού πυρήνα, κοινού κινητικού και γεφυρικού τριδυμικού πυρήνα. Δεδομένου του γεγονότος ότι κανένα παρόμοιο πρότυπο δεν έχει διερευνηθεί έως τώρα σε απομυελινωτικές νόσους, μελετήσαμε μια ομάδα ενήλικων C57BL/6 μυών ανά χρονικά διαστήματα σε μια MOG-επαγόμενη πειραματική αυτοάνοση εγκεφαλομυελίτιδα (ΠΑΕ), ένα μοντέλο πολλαπλής σκλήρυνσης, καθώς επίσης και μια ομάδα φυσιολογικών πειραματοζώων (naive ζώα). Ο in situ υβριδισμός (ISH) πραγματοποιήθηκε με σκοπό τον εντοπισμό των σημείων έκφρασης του Nogo-A mRNA σε τομές εγκεφάλου και νωτιαίου μυελού πάχους 26μιη, χρησιμοποιώντας RNA ανιχνευτές που σημάνθηκαν με διγοξυγενίνη. Η real-time PCR χρησιμοποιήθηκε με σκοπό την ποσοτικοποίηση της έκφρασης μεταξύ όλων των ομάδων των ζώων ενώ τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν και εξετάστηκαν για την παρουσία στατιστικά σημαντικών διαφορών. Η ιστοχημική ανάλυση με ISH αποκάλυψε ένα πρότυπο έκφρασης παρόμοιο με αυτό που έχει παρατηρηθεί σε ενήλικες επίμυες και η real-time PCR έδειξε μια χρονο-ανεξάρτητη μεταβολή των mRNA επιπέδων για τα εγκεφαλικά εκχυλίσματα ενώ μια προοδευτική αύξηση των μεταγράφων με κορύφωση στην οξεία φάση ακολουθούμενη από πτώση στη χρόνια, για τα δείγματα νωτιαίου μυελού. Βάση όλων των παραπάνω, είναι εμφανές ότι αυτές οι αλλαγές σχετίζονται με τις φλεγμονώδεις διεργασίες που συμβαίνουν στο ΚΝΣ τις συγκεκριμένες χρονικές περιόδους τονίζοντας έτσι την σχέση του μορίου με την ανοσοδιαμεσολαβούμενη απομυελίνωση.