Μελέτη επι της μη ριβοσωμικής πεπτιδυλ - τρανσφεράσης FEMB άγριου τύπου και μεταλλαγμάτων της από το Staphylococcus aureus

Abstract

Ο Staphylococcus aureus αποτελεί έναν από τους σημαντικότερους παράγοντες υπεύθυνους για πρόκληση ενδονοσοκομειακών λοιμώξεων. Αυτό οφείλεται στην αλόγιστη χρήση αντιβιοτικών με αποτέλεσμα την εμφάνιση ανθεκτικών στελεχών. Συνεπώς, γεννάται η ανάγκη ανάπτυξης νέων, αποτελεσματικών αντιβιοτικών. Στόχος αντιβιοτικών αποτελεί το κυτταρικό τοίχωμα των βακτηρίων καθώς και η διαδικασία δημιουργίας του. Το πεπτιδογλυκανικό τμήμα του κυτταρικού τοιχώματος του βακτήριου Staphylococcus aureus αποτελείται από γραμμικές αλυσίδες εναλλασσόμενων μονάδων Ν-ακετυλογλυκοζαμίνης (GlcNAc) και Ν-ακετυλομουραμικού οξέος (MurNAc), οι οποίες συνδέονται μεταξύ τους με πενταπεπτίδια γλυκίνης. Τα μόρια της γλυκίνης ενσωματώνονται με τη δράση μη ριβοσωμικών πεπτιδυλ-τρανσφερασών της οικογένειας FemABX, ενώ δότης των μορίων γλυκίνης είναι μόρια Gly-tRNAoly. Επομένως, η ανίχνευση και η μελέτη των παραγόντων που εμπλέκονται σε αυτή τη διαδικασία δύναται να αποκαλύψει πιθανούς στόχους αντιβιοτικών. Στη παρούσα διπλωματική εργασία πραγματοποιήθηκε η κλωνοποίηση του γονιδίου της πρωτεΐνης FemB από στελέχη του βακτηρίου Staphylococcus aureus και ακολούθησε η υπερέκφρασή της σε κύτταρα Ε. coll καθώς και η απομόνωσή της. Επίσης, διερευνήθηκε η ύπαρξη μεταλλάξεων στο γονίδιο της πρωτεΐνης FemB. Σκοπός της μελέτης ήταν να αποτελέσει ένα βήμα για την διαλεύκανση των παραγόντων που εμπλέκονται στην δημιουργία του κυτταρικού τοιχώματος των Gram (+) βακτηρίων.