Μελέτη ανίχνευσης πολυμορφισμών σε μιτοχονδριακά tRNA γονίδια σε φυσιολογικό ανθρώπινο ελληνικό πληθυσμό

Abstract

Ένας μεγάλος αριθμός μεταλλάξεων που ανιχνεύθηκαν σε μιτοχονδριακά γονίδια tRNA έχει συνδεθεί τα τελευταία χρόνια με την εμφάνιση εξαιρετικά ετερογενών ασθενειών με ποικίλα κλινικά συμπτώματα στον άνθρωπο. Ο λόγος για τον οποίο συμβαίνει αυτό έγκειται στον κεντρικό ρόλο των μορίων tRNA στη μιτοχονδριακή πρωτεϊνοσύνθεση, όπου εμπλέκονται στη σύνθεση ένζυμων απαραίτητων για τον ενεργειακό μεταβολισμό. Στην πλειοψηφία των μιτοχονδριακών μορίων tRNA έχουν παρατηρηθεί τόσο πολυμορφικές μεταλλάξεις, όσο και μεταλλάξεις οι οποίες έχουν χαρακτηρισθεί ως παθογόνες. Οι πρώτες δεν επηρεάζουν τη δομική ακεραιότητα ή τη λειτουργικότητα των μιτοχονδριακών tRNAs και συνεισφέρουν στη ποικιλομορφία μεταξύ των ανθρώπινων πληθυσμών. Στη παρούσα μελέτη εξετάστηκε η ύπαρξη τέτοιων πολυμορφισμών στα γονίδια tRNALeu(UUR), tRNALys, tRNAHis, tRNASer(AGY) και RNALeu(CUN) σε ελληνικό πληθυσμό φυσιολογικών ατόμων' μελέτη η οποία διεξάγεται για πρώτη φορά στον Ελλαδικό χώρο. Τα συγκεκριμένα γονίδια επιλέχθηκαν διότι συγκεντρώνουν, σύμφωνα με τη διεθνή βιβλιογραφία, αρκετά υψηλό αριθμό ουδέτερων πολυμορφισμών: Τα δύο πρώτα γονίδια συγκεντρώνουν μικρότερο αριθμό ουδέτερων πολυμορφισμών (7 και 9 αντίστοιχα), ενώ τα τρία τελευταία μεγαλύτερο (11, 13 και 11 αντίστοιχα). Ειδικότερα, από δείγματα ολικού αίματος 150 ατόμων, απομονώθηκαν και ενισχύθηκαν με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) τα παραπάνω γονίδια καθώς και τμήματα των παρακείμενων γονιδίων τους. Ακολούθως, η ανίχνευση των πολυμορφισμών στα προϊόντα PCR πραγματοποιήθηκε με την τεχνική του πολυμορφισμού διάταξης μονήρους αλυσίδας (SSCP) και η περαιτέρω ταυτοποίηση τους επετεύχθη ύστερα από ταυτοποίηση της DNA αλληλουχίας τους (sequencing). Συνολικά, ανιχνεύθηκαν 16 πολυμορφισμοί στα 150 άτομα: 11 ήδη ταυτοποιημένοι και 5 που παρατηρούνται για πρώτη φορά.