Εφαρμογή μοριακής μεθόδου για τη διάγνωση λεπτοσπείρωσης και σύγκριση με κλασσικές μικροβιολογικές προσεγγίσεις

Abstract

Η λεπτοσπείρωση αποτελεί μία ζωονόσο που προκαλείται από στελέχη του γένους Leptospira . Δεν είναι συχνή νόσος για τον άνθρωπο με εξαίρεση τις τροπικές περιοχές . Είναι επαγγελματικό νόσημα των ατόμων που ασχολούνται με τα ζώα . Η λεπτοσπείρωση διαβιβάζεται από τα ούρα ενός μολυσμένου ζώου, και είναι μεταδοτικό εφ' όσον είναι ακόμα υγρό. Οι άνθρωποι μολύνονται μέσω της επαφής με το νερό, τα τρόφιμα, ή το χώμα που περιέχει τα ούρα από αυτά τα μολυσμένα ζώα. Αυτό μπορεί να συμβεί με την κατάποση των μολυσμένων τροφίμων ή του νερού ή μέσω της επαφής δερμάτων. Στους ανθρώπους, η μόλυνση από leptospira προκαλεί ένα ευρύ φάσμα των συμπτωμάτων, και μερικές φορές μολυσμένα άτομα μπορεί να μην εμφανίσουν κανένα σύμπτωμα. Η λεπτοσπείρωση είναι μια διφασική ασθένεια που αρχίζει με συμπτώματα όπως (πυρετός, ψύχρες, έντονος πονοκέφαλος). Η πρώτη φάση επιλύει, και ο ασθενής είναι εν συντομία ασυμπτωματικός έως ότου αρχίζει η δεύτερη φάση. Αυτό χαρακτηρίζεται από τη μηνιγγίτιδα, τη ζημία συκωτιού (που προκαλούν τον ίκτερο), και τη νεφρική ανεπάρκεια κ.λπ. Η Leptospira ανήκει στο γένος των βακτηριδίων spirochaete, συμπεριλαμβανομένου ενός μικρού αριθμού παθογόνων και σαπροφυτικών ειδών. Τα μέλη Leptospira ομαδοποιούνται επίσης σε ομότυπους σύμφωνα με την αντιγονική συγγένειά τους. Υπάρχουν αυτήν την περίοδο πάνω από 200 ομότυποι που αναγνωρίζονται. Μερικοί ομότυποι βρίσκονται σε περισσότερα από ένα είδη Leptospira. Αν και πάνω από 200 ομότυποι Leptospira έχουν περιγράφει, όλα τα μέλη του γένους έχουν την παρόμοια μορφολογία. Η Leptospira είναι σπειροειδής διαμορφωμένα βακτήρια που είναι 6-20 μιη μακρύ και 0.1 μπι στην περίμετρο. Επειδή είναι τόσο λεπτά, ζωντανή Leptospira παρατηρείται καλύτερα από τη μικροσκόπηση σε σκοτεινό πεδίο. Η Leptospira είναι Gram -αρνητικό βακτήριο που αποτελείται από μια κυτταροπλασματική και εξωτερική μεμβράνη. Εντούτοις, το στρώμα πεπτιδογλυκάνης συνδέεται με το κυτταρόπλασμα παρά την εξωτερική μεμβράνη, μια ρύθμιση που είναι μοναδική. Το αξονικό νημάτιο της Leptospira επεκτείνεται από την κυτταροπλασματική μεμβράνη στις άκρες των βακτηριδίων στο περιπλασμικό διάστημα και είναι απαραίτητα για την κινητικότητα της Leptospira. Η μελέτη που πραγματοποιήθηκε είχε ως σκοπό την ανίχνευση της λεπτόσπειρας με μοριακές τεχνικές και τη σύγκριση αυτών με κλασσικές μικροβιολογικές προσεγγίσεις. Κατά τη διάρκεια της μελέτης εξετάστηκαν συνολικά 60 δείγματα (ΕΝΥ/ αίμα/ ούρα) ύποπτα για λεπτοσπείρωση. Στις ορολογικές εξετάσεις 17 από τα 60 δείγματα παρουσίασαν ειδικά αντισώματα IgG και IgM. Σε αντίθεση με τις ορολογικές δοκιμές, οι μοριακές τεχνικές που εφαρμόστηκαν δεν επιβεβαιώσαν κανένα από τα 17 δείγματα που ήταν οροθετικά. Η χρησιμότητα της PCR αξιολογείται όταν εφαρμόζεται στα αρχικά στάδια της νόσου ακόμα και όταν δεν έχουμε χαρακτηριστικά συμπτώματα. Η PCR είναι ευαίσθητη, ειδική και γρήγορη μέθοδος για την διάγνωση της λεπτοσπείρωσης όταν συγκρίνεται με τις ορολογικές μεθόδους και συνδράμει στην έγκυρη διάγνωση της νόσου.