Ανάπτυξη και εφαρμογή μοριακών δεικτών για την ταυτοποίηση ειδών κρέατος στην αλυσίδα εμπορίας τους

Abstract

Στην παρούσα εργασία αναπτύχθηκε μία μοριακή τεχνική, στόχος της οποίας είναι ο εύκολος, γρήγορος και αποτελεσματικός προσδιορισμός της προέλευσης, σε επίπεδο είδους, του κρέατος που περιέχεται σε τρόφιμα. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε στο μιτοχονδριακό DNA που απομονώθηκε από μυϊκό ιστό νωπού ή επεξεργασμένου κρέατος πουλερικών (όρνιθα, γαλοπούλα, πάπια, χήνα, φασιανός, πέρδικα, μπεκάτσα, στρουθοκάμηλος, ορτύκι και τσίχλα). Η τεχνική που εφαρμόστηκε ήταν η PCR-RFLP. Αρχικά ενισχύθηκε με την μέθοδο PCR τμήμα των γονιδίων Cyt b μεγέθους 376bp και 12S rRNA μεγέθους 485bp. Οι ολιγονουκλεϊνικοί εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν κοινοί για τα παραγωγικά ζώα (universal primers). Στην συνέχεια πραγματοποιήθηκαν πέψεις με δεκατέσσερα διαφορετικά ένζυμα περιορισμού και ηλεκτροφορητικός διαχωρισμός των τμημάτων περιορισμού σε πηκτή πολυακρυλαμίδης. Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων συμπεραίνουμε ότι το γονίδιο 12S rRNA είναι περισσότερο πολυμορφικό έναντι του γονιδίου Cyt b όσον αφορά τα εξεταζόμενα είδη. Έτσι θεωρήθηκε καταλληλότερος μοριακός δείκτης για χρήση σε μελέτες διαχωρισμού πουλερικών. Η πέψη του 12S rRNA με το ένζυμο περιορισμού Acil διαχώρισε επιτυχώς και τα δέκα πτηνά, παρουσιάζοντας ειδικά πρότυπα για το κάθε είδος ικανά να δώσουν μία μονοσήμαντη απάντηση για την προέλευση των δειγμάτων που έχουν αναλυθεί. Η μέτρια επεξεργασία του κρέατος δεν εμπόδισε την ταυτοποίηση του, αφού παρουσίασε όμοια πρότυπα με το νωπό. Τέλος η μέθοδος αυτή κρίθηκε ικανή προς ανίχνευση μιγμάτων κρέατος, πράγμα που θα μπορούσε να την καταστήσει πολύτιμο εργαλείο για τον έλεγχο της νοθείας στις βιομηχανίες κρέατος και τις επιχειρήσεις εστίασης.