Μελέτη της βιογένεσης και μεταφοράς του tRNA : ο ρόλος του συμπλόκου της Arc1p στην αμινοακυλίωση
Προβολή/ Άνοιγμα
Συγγραφέας
Καρανάσιος, ΕλευθέριοςΌνομα μέλους επιτροπής
Γεωργάτσου, Έλενα
Σταθόπουλος, Κωνσταντίνος
Όνομα Επιβλέποντος
Σίμος, Γεώργιος
Ημερομηνία
2007Γλώσσα
el
Πρόσβαση
ελεύθερη
Επιτομή
Στην παρούσα διδακτορική διατριβή μελετήθηκαν οι μοριακοί μηχανισμοί που
εμπλέκονται στη δημιουργία του τριμερούς συμπλόκου αμινοακυλίωσης του tRNA
του S. cerevisiae, που αποτελείται από τις πρωτεΐνες Arclp, MetRS και GluRS,
καθώς και ο ρόλος των μη καταλυτικών επικρατειών των δύο ενζύμων. Αρχικά
χαρακτηρίστηκαν ποσοτικά οι αλληλεπιδράσεις ανάμεσα στις πρωτεΐνες του
συμπλόκου χρησιμοποιώντας κυρίως τη μέθοδο συντονισμού πλασμονίων επιφάνειας
στο σύστημα Biacore. Η ανάλυση αυτή έδειξε ότι η Arclp έχει μεγαλύτερη συγγένεια
για την GluRS σε σύγκριση με τη MetRS, απέδειξε ότι οι καταλυτικές επικράτειες
των συνθετασών δεν συμμετέχουν στη δημιουργία του συμπλόκου, και πρότεινε την
ανεξάρτητη πρόσδεση των δύο συνθετασών στην Arclp. Στη συνέχεια
πραγματοποιήθηκε ανάλυση της συνεισφοράς συγκεκριμένων αμινοξέων στο
σχηματισμό του συμπλόκου με κατασκευή σημειακών μεταλλαγμάτων και των τριών
πρωτεϊνών του συμπλόκου και τον έλεγχο της ικανότητας τους να σχηματίζουν
σύμπλοκο in vivo και in vitro. Τα αποτελέσματα ταυτοποίησαν κατάλοιπα αμινοξέων
που είναι σημαντικά για την κάθε αλληλεπίδραση, ποσοτικοποίησαν τη συμμετοχή
τους και υπέδειξαν ότι ο σχηματισμός του συμπλόκου μεσολαβείται κατά κύριο λόγο
από δυνάμεις Van der Waals. Επιπλέον, η υποκυτταρική κατανομή των σημειακών
μεταλλαγμάτων απέδειξε ότι η υποκυτταρική κατανομή της MetRS εξαρτάται από τη
δημιουργία συμπλόκου με την Arclp. Τέλος, για την κατανόηση του ρόλου των Ν-
τελικών προεκτάσεων των δύο συνθετασών και της λειτουργίας της TRBD της
Arclp, κατασκευάστηκαν χιμαιρικές πρωτεΐνες στις οποίες οι καταλυτικές
επικράτειες της MetRS (ΜΚ) ή της GluRS (ΕΚ) συνδέθηκαν απευθείας στην TRBD
της Arclp. Η μελέτη αυτή έδειξε ότι η ΜΚ-TRBD μπορεί να υποκαταστήσει
λειτουργικά το σύμπλοκο Arclp/MetRS τόσο σε σχέση με την καταλυτική του
απόδοση όσο και με την υποκυτταρική του κατανομή και πρότεινε ότι ο μοναδικός
ρόλος της Ν-τελικής επικράτειας της MetRS είναι η δημιουργία συμπλόκου με την
Arclp. Αντίθετα, η σύντηξη της TRBD στην ΕΚ δεν επηρέασε σημαντικά την
λειτουργία της καταλυτικής επικράτειας του ενζύμου, ούτε άλλαξε την υποκυτταρική
του κατανομή.
Ακαδημαϊκός Εκδότης
Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Ιατρικής.
Collections
- Διδακτορικές Διατριβές (ΤΙ) [629]
- Διδακτορικές Διατριβές ΠΘ [1572]