Η σύνδεση της 5' διφωσφορικής γουανοσίνης στη νευροτοξίνη των ηωσινόφιλων κυττάρων : κινητικές και κρυσταλλογραφικές μελέτες
Προβολή/ Άνοιγμα
Συγγραφέας
Σπανού, ΧριστίναΌνομα Επιβλέποντος
Λεωνίδας, Δημήτρης Δ.
Ημερομηνία
2010Γλώσσα
el
Λέξη-κλειδί
Σημειώσεις
Παρατηρήσεις έκδοσης: παρόραμα στη σελιδαρίθμηση.
Πρόσβαση
ελεύθερη
Επιτομή
Κατά την εκπόνηση αυτής της εργασίας αρχικά διεξήχθει ετερόλογη
έκψραση, απομόνωση και καθαρισμός της ηωσινόφιλης νευροτοξίνης (EDN) μέσω
μετασχηματισμού βακτηριακών κυττάρων.
Στη συνέχεια, μελετήθηκε με κινητικά και κρυσταλλογραφικά πειράματα η σύνδεση
της της 5' δκρωσφορικής γουανοσίνης (&DP) στην EDN. Η GDP ευρέθηκε να είναι
ένας ισχυρός αναστολέας την EDN με IC50=30 μΜ. Ο προσδιορισμός της δομής του
συμπλόκου EDN-GDP από κρυσταλλογραφικά δεδομένα ακτινών X σε υψηλή ευκρίνεια
(1.5 λ) απεκάλυψε πως στο μόριο της EDN προσδένεται ένα μόριο αναστολέα στο
καταλυτικό κέντρο και η θέση όλων των ατόμων του αναστολέα είναι πολύ καλά
καθορισμένη στο χάρτη της ηλεκτρονιακής πυκνότητας. Ο αναστολέας GDP
προσδένεται στο ενεργό κέντρο του ενζύμου με μια εκτεταμένη διαμόρφωση με την
ΡΒ φωσφορική ομάδα να βρίσκεται στην υποπεριοχή Pi(His-15, Lys 38,His-129) ενώ
η γουανίνη εντοπίζεται μακριά από την υποπεριοχή Β2, κοντά στην Βι
Συγκριτική δομική ανάλυση της σύνδεσης της GDP και άλλων νουκελοτιδικών
αναστολέων στην EDN απεκάλυψε τη δομική βάση της ενζυμικής αναστολής από την
GDP. Επίσης συγκριτική δομική ανάλυση της σύνδεσης της 6DP στην EDN και της
dGMP στην RNase Α απεκάλυψε τα δομικά χαρακτηριστικά της διαφοράς στην
συγγένεια για νουκλεοτιδικούς αναστολείς που παρουσιάζουν τα δύο αυτά ομόλογα
ένζυμα.
Ακαδημαϊκός Εκδότης
Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας. Σχολή Επιστημών Υγείας. Τμήμα Βιοχημείας και Βιοτεχνολογίας.